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NanoDrop 2000超微量分光光度計
是NanoDrop的產品,應用液體的表面張力特性,樣品體積只需要 0.5~2ul,在檢測臺上,經上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材檢測吸收值的優點。此產品設計受保護,并在*廣受歡迎,其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究。
NanoDrop 2000使用高能量氙燈(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光譜檢測,且不需要暖機,開機后立即使用。搭配高感度CCD array檢測器,檢測吸收值可高達300Abs(dsDNA濃度2~15000ng/ul),大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測。
待測樣品的均質性是NanoDrop 2000的zui高要求,一般核酸、蛋白質樣品能在檢測前以vortex mixer震勻為*,若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂,則改以55?C加熱約一分鐘,使樣品在偵測前呈現均勻狀態,以確保 2ul 具有代表性。
檢測時選擇不同檢測模式,可以得到zui快速的結果:
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。
● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜(以1mm光徑吸收值呈現)。
● A280蛋白質定量法 – 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio及蛋白質濃度。僅適用于純化后的蛋白質,須具有已知的質量消光系數(mass extinction coefficient)方可計算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結果,自動畫出標準曲線并計算R square,待測蛋白質濃度。
* 蛋白質檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,因呈色劑隨時間會逐漸加深,使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標準品,在*時間內完成檢測,以得到良好的標準曲線。每個標準曲線zui多可有七個標準品,每個標準品zui多可做五重復。
* 測蛋白質時樣品體積需使用 2ul,每個樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙(編號: 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色劑與蛋白質的殘留。
濃度范圍:
樣品種類 | zui低濃度 | zui高濃度 (超過時請稀釋樣品) | 再現性 (五重復以上) |
核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA) | 濃度范圍在 2-100 ng/ul 時,SD為 ± 2 ng/ul 濃度范圍大于 100 ng/ul 時,CV為 ± 2% |
純BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時,SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大于 10 mg/ml 時,CV為 ± 2% |
蛋白質,以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV:± 2% (在可偵測的濃度范圍內皆然) |
蛋白質,以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV:± 2% (在可偵測的濃度范圍內皆然) |
蛋白質,以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 濃度范圍在 100-500 ug/ml 時,SD為 ± 25 ug/ml 濃度大于 500 ug/ml 時,CV為 ± 5% |
蛋白質,以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 濃度范圍在 15-50 ug/ml 時,SD為 ± 4 ug/ml 濃度大于 50 ug/ml 時,CV為 ± 5% |